人白介素-2(IL-2)ELISA試劑盒
(產(chǎn)品貨號(hào)：F01260)
原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人IL-2 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IL-2與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IL-2，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液，在450nm處測(cè)OD值，IL-2濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求出標(biāo)本中IL-2濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標(biāo)板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標(biāo)抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
10×標(biāo)本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：4ng/ml | 1瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
第一抗體工作液（Biotinylated Antibody） | 6ml | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1.
10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
2.
收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。血清、血漿用血液校正液作2倍稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品和其他樣品可用標(biāo)本稀釋液稀釋。
3.
標(biāo)準(zhǔn)品液配制：取8個(gè)1.5ml離心管，第一管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在第一管中加入4000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄吖苤形?00ul棄去。第八管為空白對(duì)照。
4.
洗滌液：用重蒸水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?spanarial","sans-serif";mso-bidi-font-family: "times="" new="" roman""="">1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測(cè)程序
1.
加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃40分鐘。
2.
洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
3.
每孔加入蒸餾水和第一抗體工作液各50ul(空白加100ul水)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。
4.
洗板：同前。
5.
每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃10分鐘。
6.
洗板：同前。
7.
每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8.
每孔加入100ul終止液混勻。
9.
30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1.
所有OD值建議減除空白值后再行計(jì)算。如空白OD低于0.1，也可以直接計(jì)算。
2.
以標(biāo)準(zhǔn)品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0 pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，使用軟件取四參數(shù)多項(xiàng)式作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
3.
根據(jù)樣品OD值計(jì)算出相應(yīng)IL-2含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。軟件可以向本公司郵件索取。
試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的IL-2 檢測(cè)濃度小于2pg/ml。
2. 特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人IL-2。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10.1％。
注意事項(xiàng)
1. 檢測(cè)時(shí)所有試劑都要恢復(fù)到室溫。板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
2.
以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
3.
樣品量不夠時(shí)，可將第一步標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的加樣量減少至30ul！其他步驟不變。
4. 如果樣品含量較低，可將樣品孵育時(shí)間從37℃40分鐘改為4度過(guò)夜以提高靈敏度。
5. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。
6. 黏稠、脂血癥、黃疸或溶血的樣品可能會(huì)干擾該測(cè)定。高水平的血清白蛋白可能會(huì)干擾該測(cè)定。
7. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。僅用于科研，不能用于臨床診斷！
以上說(shuō)明書(shū)僅供參考！實(shí)際以試劑盒內(nèi)的說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)！
